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    酶標儀時間分辨熒光技術是以鑭系元素作為標記物的一種免疫檢測技術。其原理是鑭系元素(如Eu3+)具有長壽命的發(fā)射熒光，標記待檢測物質后，使用特定激發(fā)光激發(fā)，通過一定的檢測時間延遲來達到扣除本底熒光的目的，并以此來提高信噪比與檢測靈敏度。

時間分辨熒光（精度：10-18mol/L）與以下標記免疫技術相比：

優(yōu)點：精度高

放射免疫（精度：10-12mol/L）早出現，發(fā)展成熟穩(wěn)定性差，有危害，操作繁瑣

酶聯免疫（精度：10-9mol/L）安全靈敏度、重復性差

化學發(fā)光（精度：10-15mol/L）測定速度快、靈敏度高樣品不能重復測定試劑穩(wěn)定性差，試劑價格高

電化學發(fā)光（精度：10-17mol/L）本底較小、靈敏度較高非開放性試劑系統(tǒng)、不能做科研價格高

90年代以來，時間分辨熒光分析技術因其靈敏度高，操作簡便，標準曲線范圍寬，不受樣品自然熒光干擾，無放射性污染等特點，其方法學研究和臨床應用的發(fā)展十分迅速。

用三價稀土離子及其螯合物作為示蹤物，標記抗原、抗體、激素、核酸探針等物質

當反應體系發(fā)生后，如抗原抗體免疫反應、核酸探針雜交等反應，經解離—增強作用，用時間分辨熒光儀，測定后產物的熒光強度。

根據熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的.。

常規(guī)熒光免疫測定技術易受待測樣品中非特異本底熒光的干擾，靈敏度受到一定限制。于是，20世紀80年代初，在常規(guī)熒光免疫分析的基礎上發(fā)展了一種新型免疫分析技術——時間分辨熒光免疫測定(time-resolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)。其原理和方法與常規(guī)熒光免疫不同，所用標記物不是普通熒光物質，而是鑭系稀土元素銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鋱(Tb3+)等[8]，檢測設備也不同于一般的熒光分光光度計，而是使用時間分辨熒光計測量排除樣品中非特異熒光的干擾，極大地提高了測定方法的靈敏度[9]。TRFIA在靈敏度、特異性、穩(wěn)定性及測量自動化程度等方面都可與放射免疫測定(RIA)相媲美，而其標準曲線范圍寬(跨越4—5個數量級)，小檢出值可達10—18mol／L，分析速度快，遠遠超過RIA、EM及發(fā)光免疫測定，并具操作簡便，無放射性污染，因此成為免疫分析中具發(fā)展?jié)摿Φ囊豁椉夹g[10]。TRFIA的基本原理是：將鑭系元素銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鋱(Tb3+)等通過具有雙功能基團的螯合劑標記于抗體(或抗原)分子上。當標記抗體和待測抗原結合，采用紫外脈沖光(340nm，每秒閃爍1000次)進行激發(fā)，不僅發(fā)射出高強度的熒光(613nm)，而且衰變時間也較長(10～1000us)。利用延緩測量時間，待短壽的本底熒光(樣品池和待測樣品中蛋白質等自然發(fā)生的非特異性熒光，衰變時間1—10ns)全部衰變后，再行測量，所得信號*為長壽命鑭系元素螯合物的特異熒光，從而有效排除非特異本底熒光的干擾，大大提高分析的特異性和靈敏度。此外，Eu3+或Sm3+的激發(fā)光與發(fā)射光之間有很大的Stokes位移，而且激發(fā)光的光譜較寬，有利于增高激發(fā)能，增強標記物的比活性；且發(fā)射熒光的譜帶很窄，有助于降低本底，從而提高分析的特異性和靈敏度。